Подсчет лейкоцитов в камере Горяева — устройство камеры и принцип подсчета показателей

Содержание

Работа с камерой Горяева

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

image Рис 1. Сетка камеры Горяева

image Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

17 января 2019 г.

Камера Горяева – небольшое приспособление, необходимое для подсчета форменных элементов, полученных из биологических жидкостей человека. Оптическое приспособление выглядит, как стекло, внутрь которого помещается небольшое количество исследуемого материала. Оно широко используется для лабораторных методов исследования в медицинских учреждениях. Осуществляют подсчет лейкоцитов в камере Горяева по методике Нечипоренко, Амбурже.

Камера Горяева и её характеристики

Устройство представлено толстым стеклом, внутри которого имеется углубление. На нем нанесена сетка, видимая только под микроскопом, по которой врач-лаборант подсчитывает клетки. Сверху камеры помещаются предметные стекла таким образом, чтобы исследуемый материал сдавливался с двух сторон.

Камера Горяева производится в 2 вариантах:

  • двухсеточная (состоит из 2 камер);
  • четырехсеточная (состоит из 4 камер).

Цена приспособления зависит от его качества. Производитель должен отшлифовать стекло, правильно нанести сетку с помощью лазера или вакуумного напыления.

Сетка Горяева состоит из 225 квадратов. Они бывают большими и малыми. Врач перемещает микроскоп над ними слева направо, вниз, затем справа налево, пока все поля не закончатся.

Обслуживание камеры Горяева

Чтобы приспособление показывало верные результаты, за ним необходимо ухаживать. Камеру необходимо тщательно протирать перед применением. Для этого используют бинт, который смачивают в спирте. Стерилизующая жидкость должна быть качественная, чтобы на поверхности стекла не осталось осадка. Стекло готово к работе, если на нем появились радужные кольца на обеих поверхностях.

Важно! Нельзя использовать для протирания камеры вату, так как она содержит волокна, которые могут остаться на поверхности стекла, что затруднит исследование.

Камера Горяева идёт в стандартной комплектации, с покровными стеклами. Если они отсутствуют или сломались, возможно использование обычных стекол, соответствующих по размеру.

Во время работы с камерой и предметными стеклами врач-лаборант должен надевать перчатки. Это предотвращает попадание отпечатков пальцев, которые будут мешать в работе с микроскопом.

После завершения работы камера должна быть продезинфицирована. Для этого ее погружают целиком в раствор этилового спирта. Время дезинфекции составляет 30 минут. Если используется другой стерилизатор, время удлиняется до 1 часа. После завершения данного этапа устройство обрабатывают водой и протирают насухо.

Методика подсчета лейкоцитов в крови в камере Горяева

Для подсчета лейкоцитов с помощью камеры Горяева необходимо подготовить образец крови и само приспособление. Для этого выполняются следующий пункты:

  • разведение биологической жидкости раствором уксусной кислоты с метиленовым синим в пропорции 1:20;
  • стекло протирают спиртом и сухой марлевой салфеткой до появления специфических колец, при этом важно не повредить поверхность;
  • пустое стекло предварительно просматривают под микроскопом, чтобы предотвратить попадание инородных предметов;
  • полученную разведенную кровь добавляют на углубление камеры с помощью стеклянной палочки;
  • жидкость должна распределится равномерно, для этого выжидают 1-2 минуты после ее нанесения;
  • на предметное стекло направляют микроскоп, подсчитывают все лейкоциты;
  • полученную цифру вставляют в формулу, которая подсчитывает общее количество лейкоцитов в объёме жидкости.

Внимание! Если в жидкость попал воздух, подсчет лейкоцитов невозможен. Камеру промывают дистиллированной водой, наливают разведенную кровь повторно.

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева с уксусной кислотой уничтожает все эритроциты, а метиленовый синий дает окрашивание белых кровяных телец.

При получении данных пациентами или врачом следует учитывать, что метод не является достаточно точным. Лаборант может ошибиться в подсчете, пропустить некоторые клетки. Более информативные данные получают при подсчете лейкоцитов с помощью полуавтоматических анализаторов, которые в точности измеряют число клеток в 1 мл биологической жидкости.

Читайте обзор всех методик подсчета лейкоцитов.

Формула для подсчета количества лейкоцитов в камере Горяева

Подсчет клеток осуществляет, учитывая что кровь разводилась в 20 раз, клетки считались в 100 квадратах. Поэтому используют следующую формулу:

L=(a×250×20)×106/100

  • L – обозначение лейкоцитов, которые необходимо рассчитать;
  • a – количество подсчитанных лейкоцитов;
  • 250 – число, при умножении на которое получается количество клеток на 1 мкл крови, так как объём большого квадрата составляет 1/250 мкл;
  • 20 – разведение материала при подсчете лейкоцитов в камере Горяева;
  • 100 – число больших квадратов;
  • 106 – число мкл в 1 квадрате.

Подробно о том, как правильно подсчитать лимфоциты.

Норма лейкоцитов в крови и отклонения

По формуле выводится количество лейкоцитов на 1 литр крови. У здорового человека это число составляет 4-9×109/л. Показатели могут варьировать в норме, слега выходя за пределы значений, в зависимости от следующих факторов:

  • возраст;
  • прием пищи;
  • время суток;
  • состояние организма.

Если после подсчета формулы, показатель резко возрастает или снижается, исследования проводят повторно. После подтверждения результата бланк анализа передают пациенту или врачу.

Повышение лейкоцитов происходит при:

  • инфекционных, вирусных, грибковых заболеваниях (это означает, что организм борется с болезнью);
  • злокачественных и доброкачественных новообразованиях, которые приводят к резкому увеличению количества форменных элементов крови.

Снижение количества лейкоцитов появляется при нарушениях иммунной системы. Возможны следующие состояния:

  • врожденный или приобретенный иммунодефицит;
  • патологические состояния красного костного мозга, приводящие к снижению продукции форменных элементов крови.

Методика подсчета лейкоцитов в моче в камере Горяева

С помощью камеры Горяева исследуется осадок урины. Для этого биологическую жидкость оставляют на некоторое время в пробирке. Форменные элементы, другие вещества осаждаются на дно пробирки. С помощью стеклянной палочки берётся небольшое количество мочи с осадком, добавляется в полость камеры.

Дальнейшие подсчеты аналогичны методу исследования крови. Определяется количество клеток в 100 квадратах, полученный результат подставляется в формулу.

Методика подсчета лейкоцитов в моче с помощью камеры Горяева является недостаточно точной, так как возможны следующие нарушения:

  • ошибка в подсчете;
  • забор недостаточного количества осадка;
  • нахождение большего количества лейкоцитов в другой части мочи.

Поэтому при спорных результатах врачи рекомендуют пройти исследование урины с помощью полуавтоматических анализаторов. Но при подсчете лейкоцитов с помощью камеры Горяева возможно обнаружение врачом лаборантом дополнительных образований:

  • солей;
  • грибов;
  • бактерий.

Полуавтоматический анализатор выявляет только заданный параметр.

Норма лейкоцитов в моче и отклонения

В норме лейкоциты не должны находиться в урине. Возможно незначительное их количество, которое отличается по полу:

  • 3 клеток у мужчин;
  • 5 клеток у женщин.

Если количество показателей повышено, это означает, что образовался воспалительный процесс в одном из отделов мочевыделительного пути.

Камера Горяева – устройство, которое используется в медицинских учреждениях. Метод не даёт стопроцентной гарантии полученных результатов. Но врач может с помощью микроскопа найти другие клетки или образования, которые помогут поставить диагноз.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Пример подсчета лейкоцитов в камере Горяева на видео

Поделиться с подругами: –>

Лейкоциты белые кровяные тельца — играют главную роль в противомикробной защите организма. Гранулоциты фагоцитируют микробы и раз­рушают их с помощью ферментов, заключенных в гранулах, лимфоциты вырабатывают антитела и обеспечивают иммунные реакции организма.

Методика определения пробирочным методом: в пробирку наливают 0,4 мл раствора Тюрка (жидкость Тюрка содержит уксусную кислоту для разрушения эритроцитов и метиленовую синь для окраски ядер лейкоци­тов). Капиллярной пипеткой набирают из свежей капли 0,02 мл крови, осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают. При этом разведение крови в 20 раз. Кон­цом круглой стеклянной палочки отбирают каплю разведенной крови и наносят на край шлифованного стекла камеры.

Подсчет ведут в 100 больших неразгрефленных квадратах, собранных вместе по четыре. Используется малое увеличение.

Вывод формулы подсчета № 1 .

1. 100 квадратов содержат по площади 1600 малых квадратов (16х 100)

2. Объем крови над малым квадратом 1/4000 мм3

3. Разведение крови в 20 раз

Количество лейкоцитов в 1 мкл крови = в -4000-20. = Ах 50

Например: в 100 больших квадратах сетки Горяева сосчитано 130 лейкоцитов. В 1 мкл крови количество лейкоцитов будет равно 130 х 50=6500, или 6,5-103.

Для того чтобы определить содержание лейкоцитов в 1 л крови, нужно число лейкоцитов, выраженное в тыся­чах, умножить на 109.

В нашем примере количество лейкоцитов в 1 л крови равно 6,5-109.



Формула для подсчета лейкоцитов в камере горяева

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

Источник: cldtest.ru

Методика подсчета лейкоцитов крови в счетной камере Горяева

Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета лейкоцитов, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп. Объект исследованиячеловек.

Проведение работы: Счетную камеру помещают под микроскопом и рассматривают сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец Ньютона. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец ранее описанным методом. Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для лейкоцито, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 1, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с 5% раствором уксусной кислоты, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 11 (т.е. разводят кровь в 10 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.

Для подсчета лейкоцитов берут заполненный меланжер, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. При этом эритроциты разрушаются и в поле зрения остаются только лейкоциты, точнее их ядра. Т.к. уксусная кислота подкрашена метиденовым синим, ядра лейкоцитов становятся видны отчетливее. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, высушить и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Подсчитывают число лейкоцитов в 25 больших квадратах (разделенных на 400 маленьких). Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют правило Егорова: « к данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся». Подсчитав сумму лейкоцитов в 25 больших квадратах (что составляет 400 маленьких), находят среднее арифметическое число лейкоцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм 3 , умножают найденное число на 4000. Получают число лейкоцитов в 1 мм 3 разведенной крови. Умножив на величину разведения (10), получают количество лейкоцитов в 1 мм 3 цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества лейкоцитов следующая: Х = (Л х 4000 х 10)/400, где х – искомое числолейкоцитов в 1мм 3 цельной крови, Л – сумма лейкоцитов в 400 маленьких квадратах, 400 – число маленьких квадратов, в которых произведен подсчет, 10- разбавление крови. Затем полученное число лейкоцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т.е. число тысяч лейкоцитов, найденных в 1 мм 3 , умножают на 10 9 .

Оформление результатов и их оценка: Записать, сколько лейкоцитов содержится в 1 л исследуемой крови. Сравнить полученные результаты с нормой. У взрослых этот показатель составляет 6-8 тыс в 1мм 3 или (6,0 — 9,0) х10 9 .

Источник: studopedia.org

Камера Горяева. Практическое применение

  • Просмотров: 41157

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

  • Подсчет форменных элементов крови
    • Подсчет эритроцитов
    • Подсчет лейкоцитов
    • Подсчет ретикулоцитов
    • И т.п.
  • Подсчет форменных элементов мочи
  • Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
  • Вычисление концентрации спор в вакцине
  • Подсчет ооцист в препарате
  • И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2 . Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

  1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
  2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Практическое применение камеры Горяева

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Подсчет форменных элементов крови

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Формула для подсчета эритроцитов

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

Формула для подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

2. ​ Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

Таблица нормальных значений:

Источник: opticalmarket.com.ua

Что такое камера Горяева, ее технические характеристики

image Камера Горяева

Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.

Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.

Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.

Методика подсчёта лейкоцитов в моче

В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.

Читайте также:  Высокие эритроциты в крови: причины, симптомы, лечение. Норма эритроцитов в крови

Сбор мочи

В изучение идёт только первая утренняя моча в середине мочеиспускания. Для пациента важно следовать основным правилам сбора этого биоматериала. Специальной дополнительной подготовки для исследования не требуется.

Описание сетки камеры Горяева

image Сетка в камере Горяева

Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом. Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм. Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм3 или 10-4 мл.

Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.

Норма лейкоцитов и отклонения

Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.

На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:

  • приём пищи перед сдачей крови,
  • стресс,
  • беременность или менструация у женщин,
  • переохлаждение или перегрев,
  • большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.

Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.

Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.

Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л. Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови. Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).

Правило Егорова для подсчета форменных элементов

image Правильный подсчет клеток в сетке

Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.

Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки. Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова. Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.

Взятие крови в пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов по Н. М. Николаеву

Для каждого взятия крови берут две нумерованные пробирки, серологическую и агглютинационную. В серологическую пробирку помещают 4 мл 3% раствора хлористого натрия или реактива Гайема, а в агглютинационную – 0,4 мл 3 % раствора уксусной кислоты. В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, взятой капилляром от гемометра, и тотчас же смешивают содержимое пробирок, вращая их между ладонями.

В серологической пробирке (для эритроцитов) получают разведение крови в 200 раз, а в агглютинационной (для лейкоцитов) – в 20 раз.

Методика подсчета лейкоцитов

image При ошибке анализатора помогает камера Горяева

Читайте также:  Почему бывает плохой анализ мочи у детей?

Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.

Подсчет при помощи камеры Горяева оправдан в тех случаях, когда автоматический анализатор не способен верно идентифицировать клетки крови пациента. Это случается при онкологических заболеваниях системы крови и некоторых других болезнях, при которых клетки имеют нетипичный вид и объем. К плюсам визуального подсчета относится возможность углубленной диагностики благодаря тому, что опытный врач способен отличить измененные клетки, характерные для отдельных патологий, и отразить их наличие в результатах анализа.

image Лейкоциты должны быть подготовленными перед работой

Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.

После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.

После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.

Определение лейкоцитов в крови

Методика подсчёта лейкоцитов

Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.

Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу. Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой. Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.

Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.

Х = (n × 250 × 20) / 100 или Х = n × 50

Х – количество лейкоцитов.

n – число, полученное в результате подсчёта в камере.

Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.

image

Методика подсчета эритроцитов

image Соблюдение алгоритма позволяет произвести точный подсчет клеток

Читайте также:  Базофилы понижены у взрослого — о чем это говорит, лечение

Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.

Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в специальных счетных камерах. Для этой цели пользуются счетной камерой Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенными на него двумя сетками. Сетки отделены одна от другой углублениями и делятся разграничительными линиями на 225 квадратов. Площадь сетки 9 мм2, высота, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла в камере, 0,1 мм, объем 0,9 мм3. Перед заполнением камеры кровью ее моют водой и насухо вытирают.

Вычисление цветного показателя (цветной коэффициент)

Цветной показатель выражает среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. В норме цветной коэффициент равняется 1,0 при 100% гемоглобина и 5 000 000 эритроцитов в 1 мм3 крови. Его рассчитывают исходя из следующей пропорции: найденное количество гемоглобина (в единицах) так относится к его нормальному количеству, как найденное количество эритроцитов к их нормальному числу.

Например, если найденный гемоглобин равен 88 ед., а количество эритроцитов 4 8000 000 в 1 мм3, то цветной показатель равен 0,91.

При количестве эритроцитов меньше 1 000 000 делить надо на две первые цифры подсчитанного числа эритроцитов. Цветной показатель в норме равен 0,9-1,1.

Лейкоцитарная формула

Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.

Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.

  • Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
  • Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.

Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.

Оцените статью
Рейтинг автора
5
Материал подготовила
Витужкова Елена Олеговна
Врач терапевт высшей категории
Написано статей
164
А как считаете Вы?
Напишите в комментариях, что вы думаете – согласны
ли со статьей или есть что добавить?
Добавить комментарий